Mercredi Ploskirev (Bactoagar F): description. Microbiologie médicale

Le milieu de Ploskirev (également appelé Bactoagar G) est un milieu nutritif pour la culture de certains microorganismes, principalement Shigella et Salmonella. Source de l'utilisation de matériaux infectés: urine, bilan, mouvements intestinaux.

Histoire

Nikolai Ivanovich Ploskirev est un microbiologiste soviétique et médecin honoré de la RSFSR. Il est né en 1869 et est décédé en 1948, la plupart de sa vie travaillant dans sa ville natale – Tomsk.

En 1888, il, un futur scientifique, n'a pas terminé la sixième année de l'école, est entré dans le service militaire. Il a terminé ses études seulement en 1892, après quoi il a passé des examens pour l'admission à l'Université Impériale Tomsk, il a étudié à la faculté de médecine. En 1898, il reçoit le titre de médecin.

Ploskirev a participé à la guerre russo-japonaise, puis a travaillé dans l'hôpital de Tomsk. En 1910, il fut nommé chef de l'hôpital Dermatovenerologic de Tomsk et pendant trente ans était son chef permanent. De même, le scientifique a été l'un des fondateurs du dispensaire dermatologue à Tomsk.

Nikolai Ivanovich Ploskirev a écrit une série d'œuvres consacrées à la lutte contre les maladies vénériennes.

Composition

Mercredi Ploskirev – un matériau pour la culture des bactéries intestinales, et donc, doit contenir plusieurs types d'éléments nutritifs. Il est produit sous forme sèche.

L'hydrolysat pancréatique du sprat (10,4 g / l) a une part assez importante de sa masse totale. Un peu moins est nécessaire pour le citrate d'hydrogène disodique (8,5 g / l). Il contient également du bouillon nutritif sec et du sucre au lait (8,62 et 7,3 g / l).

Le deuxième nom pour le milieu de Ploskirev est Bactoagar J. Il contient de la gélose d'une quantité de 6,94 g / l. La teneur en sulfate de sodium anhydre est de 5,1 g / l. Il existe la présence de phosphate déshydraté disodique – 2,1 g / l, les sels de sodium des acides biliaires d'environ 3,46 g / l et les sels de cendres – 2,4 g.

Moins de gramme contient des indicateurs – rouge neutre (0,05) et vert brillant (0,0002). Le contenu en iode est de 0,13.

Application

L'étude des processus biochimiques des bactéries joue un rôle très important dans le diagnostic des maladies qui provoquent des organismes anaérobies. Les espèces incluses dans cette famille sont des centaines. Ils sont presque identiques dans la morphologie et les propriétés culturelles, et la manière la plus fiable de les distinguer les uns des autres est d'étudier la biochimie.

L'étude commence par le semis de matériel pathologique dans le milieu nutritif. Il est différentiel pathologique pour le groupe intestinal de bactéries, et sa composition, en plus de la gélose agar-agar, comprend un indicateur et du lactose. La capacité de traiter le lactose est un signe important de différenciation des entérobactéries. Si cela est détecté, le pH se déplace vers l'acidité et un indicateur qui tache la colonie est déclenché.

Dans d'autres pays, d'autres milieux nutritifs peuvent être utilisés, mais le mécanisme de leur action correspond aux trois plus fréquents en Russie – les environnements d'Endo, Levin et l'environnement de Ploskirev.

Description de la méthode

À l'étranger, l'analogique de l'environnement de Ploskirev est l'Agar MacConkey. Dans la forme finie, la solution est transparente, elle a une teinte jaune clair-jaune. Les colonies capables de traiter le lactose ont une couleur rouge (fourreau) dans le milieu de Ploskirev . Si la bactérie ne peut pas la traiter, la colonie est incolore ou de couleur faible.

En raison du fait que le milieu de Ploskirev contient des substances inhibitrices (vert brillante, sels biliaires, iode), il supprime pratiquement complètement la croissance de la flore grammative et, le premier jour, inhibe de manière significative la croissance de l'eshéchiria, ainsi que l'autre accompagnant généralement la microflore.

La deuxième étape

Ensuite, le choix de la colonie d'intérêt a lieu, et il est semé aux principaux médias de différenciation et d'accumulation. Le média sur lequel se déroule l'ensemencement doit contenir plusieurs substrats. La culture bactérienne doit détecter l'activité enzymatique par rapport à elle, outre que les médias sont situés dans des tubes à essai de sorte qu'il y ait deux zones:

• Celui sur lequel l'agar est faussé;
• Avec une colonne.

La colonie qui intéresse le chercheur est peuplée sur la partie en pente avec un accident vasculaire cérébral dense, et dans la colonne – avec une piqûre. À ce stade, les médias de Russell, Kligler ou Olkenitsky sont utilisés. En tant que diagnostic différentiel, le support de Ploskirev est également utilisé.

Microbiologie et agents pathogènes

L'agar de Ploskirev est un facteur important dans la détection des infections causées par les entérochactéries. Ainsi, par exemple, il développe et différencie les colonies de microorganismes, qui sont les agents causaux de la dysenterie bactérienne. Ce sont des organismes anaérobies qui entrent dans le genre Schigella.

Comme tous ceux qui font partie de la famille des bactéries intestinales, les shigella sont le genre de tiges, la taille de deux micromètres. Ils ne forment pas de capsules et de spores, n'ont pas de flagelles – ce qui leur permet de distinguer de Salmonella, qui est à son tour mobile. Ils se développent parfaitement sur les environnements les plus simples, à une température juste au-dessus de la température ambiante (35-37 ° C) et de 7,4 pH. Par la nature de la croissance, les colonies ne diffèrent pas de la salmonelle.

Comme mentionné ci-dessus, les microorganismes ne peuvent avoir pratiquement aucune différence morphologique, mais ils diffèrent considérablement dans les processus biochimiques d'activité vitale. Ainsi, à l'exception de Shigella Newcastle, la fermentation des hydrates de carbone est la formation d'acide sans gaz. À l'exception de Shigella Sonne, ils ne peuvent fermenter le lactose, mais décomposer le glucose. En outre, leurs caractéristiques clés peuvent être attribuées au fait qu'elles peuvent réduire la piraterie aux nitrites. Leurs colonies ne coupent pas l'urée, et dans le milieu nutritif il n'y a pas de liquéfaction de la gélatine.

Collecte et préparation d'inoculum

Pour détecter les agents pathogènes de la dysenterie, des études microbiologiques des milieux infectés, c'est-à-dire les mouvements intestinaux du patient, sont nécessaires. Après avoir reçu le matériel, il est nécessaire de semer le plus tôt possible. Si cela n'est pas possible, la source doit être placée dans un conservateur – un mélange de tampon phosphate ou de glycerol. À une température de 4 ° C, ils peuvent être stockés pendant pas plus d'un jour. La collecte du matériau doit être effectuée avec un tube de verre rectal, qui est inséré dans le rectum.

Pour l'étude de la matière, des morceaux purulents-visqueux sont sélectionnés, qui doivent être lavés dans deux ou trois tubes de solution isotonique de chlorure de sodium.

L'application de bactéries pathogènes au milieu de Ploskirev est réalisée avec une spatule en verre. Il est nécessaire dans une petite zone de le frotter dans l'agar, puis déchirer la spatule du milieu, et le matériau résiduel doit être frotté dans la surface non scellée. Si le semis est effectué en plusieurs tasses, il est nécessaire de les semer chaque fois avec une nouvelle portion.

S'il n'y a pas de morceaux mucopurulents dans les excréments pris pour analyse, cela ne signifie pas que les microorganismes pathogènes ne s'y trouvent pas. Dans un tel cas, il faut imiter les excréments dans 10 ml de solution de chlorure de sodium (concentration 0,85%), puis semer une ou deux gouttes sur le milieu de Ploskirev. Les selles émulsionnées peuvent être semées dans le bouillon de sélénite. Il est également utilisé s'il existe des vomissements ou de l'eau de lavage au lieu des excréments.

Diagnostic microbiologique

Au premier stade de la recherche microbiologique, les bactéries pathogènes sont ensemencées en deux tasses, puis observent comment la shigella pousse. Sur le milieu de Ploskirev, une seule culture est produite, la seconde est sur Levin ou le médium d'Endo.

Compte tenu de l'émergence de souches de Shigella résistantes aux antibiotiques, la lévomycétine est ajoutée aux médias. Ensuite, pendant la journée, l'incubation a lieu dans un thermostat à une température de 37 ° C.

Le deuxième jour, vous devez étudier les colonies adultes. Ceux qui ne deviennent pas incolores sur l'environnement de diagnostic différentiel doivent être éliminés dans le médium de Russell ou une courte série "motelle". Des recherches complémentaires sont effectuées selon l'algorithme des cultures primaires. Les colonies de shigellas sur le milieu de Ploskirev se développent sous la forme de colonnes transparentes, incolores et petites. Ils sont de deux types:

• Aplatie avec des bords déchiquetés;
• Arrondi, convexe, avec un lustre humide caractéristique.

Trois ou quatre colonies doivent être microscopiées et examinées pour la mobilité. Dans le cas où ces derniers ne sont pas trouvés, ils sont déplacés vers l'environnement d'Olkenitsky afin de désigner une culture pure. En l'absence de colonies caractéristiques de shigella, ou s'il n'y a pas de croissance, il est nécessaire de semer du bouillon de sélénite sur l'agar Endo ou Ploskirev. Si les colonies typiques sont présentes en quantités suffisantes, une réaction d'agglutination est approximative. Utilisé un mélange de SERA Sonne et Flexner, la réaction a lieu sur le verre.

Recherche approfondie

Le troisième jour, les changements survenus dans les colonies sur l'environnement Russellien sont notés. S'il y a une culture qui ne décompose pas le lactose, et que le glucose se fermente avec la formation d'acide, il est séparé et examiné, la microscopie est effectuée, et le semis est également effectué sur la série "motley", mais cette fois il est déployé. De la même manière, un test d'agglutination est effectué aux fins de l'identification sérologique.

Le dernier jour, vous pouvez faire une conclusion sur la base des changements dans la «série moto» (qu'il y ait une fermentation des glucides), ainsi que pour résumer la réaction d'agglutination.

Stockage et préparation

La préparation de l'agar Ploskirev se fait de cette façon:

1. 55 g de substance sèche sont agités dans un litre d'eau distillée.
2. Faire bouillir pendant deux à trois minutes, jusqu'à ce que l'agar soit complètement fondu.
3. Verser dans des boîtes de Petri (la stérilité est optionnelle) avec une couche de 5-6 mm.
4. Les tasses sont laissées ouvertes pendant une heure et demie à température ambiante (18 à 25 degrés). À la fin de cette période, le milieu se fige et sèche suffisamment.

L'environnement de Ploskirev est léger et hygroscopique. La poudre doit être stockée dans un emballage scellé, l'humidité relative de l'air dans la pièce ne doit pas dépasser 60%. La température optimale de stockage est de 2 ° C à 25 ° C. Il est nécessaire de se conformer aux règles de stockage ci-dessus, sinon des résultats de recherche inexacts sont possibles.