Les tests sérologiques: types, utilisation

Le diagnostic de laboratoire de presque toutes les maladies infectieuses est basée sur la détection du sang dans les anticorps du patient, qui sont produites par l'antigène de l'agent pathogène, les méthodes sérologiques. Ils sont allés dans la pratique médicale à la fin du XIXe – début du XXe siècle.

Le développement de la science a contribué à définir la structure antigénique des microbes et des formules chimiques de leurs toxines. Il est possible de créer non seulement thérapeutique, mais aussi du sérum de diagnostic. Ils sont obtenus par l'administration d'agents pathogènes atténués animaux de laboratoire. Après plusieurs jours de trempage des lapins ou des souris de sang préparés les produits utilisés pour l'identification des bactéries ou leurs toxines à l'aide de tests sérologiques.

La manifestation extérieure de cette réaction dépend des conditions de sa formulation et de l'état d'antigènes dans le sang du patient. Si les microbes sont des particules insolubles, elles se déposent, lysées, immobilisé ou lié dans le sérum. Si les antigènes sont solubles, il semble que le phénomène de la neutralisation ou la précipitation.

agglutination (PA)

Sérologiques test d'agglutination est très spécifique. Il est facile à réaliser et est tout à fait clair pour détecter rapidement la présence d'antigènes dans le sérum du patient. Il est utilisé pour la mise en réaction Vidal (diagnostic de la fièvre typhoïde et paratyphoïde) et Weigl (typhus).

Il est basé sur une interaction spécifique entre les anticorps humains (ou agglutinines) et les cellules microbiennes (de agglyutenogenami). À la suite de leur interaction sont formés des particules qui précipitent. Ceci est un signe positif. Pour la mise en réaction peut être utilisé des agents microbiens vivants ou morts, champignons, protozoaires, cellules sanguines et des cellules somatiques.

la réaction chimique se déroule en deux phases:

1. Composé spécifique d'anticorps (AT) avec des antigènes (Ag).
2. Non spécifique – le dépôt des conglomérats AG-AT, à savoir la formation du agglutinent.

Réaction agglutination indirecte (TPHA)

Cette réaction est plus sensible que le précédent. Il est utilisé pour le diagnostic des maladies causées par des bactéries, des parasites intracellulaires, protozoaires. Il est tellement spécifique qui peut détecter des concentrations même très faibles d'anticorps.

Pour sa formulation en utilisant des globules rouges de mouton purifiée et globules rouges de l'homme prétraités avec des anticorps ou antigènes (cela dépend de ce laboratoire veut trouver). Dans certains cas, les globules rouges humains traités avec des immunoglobulines. réponse sérologique d'érythrocytes est considérée comme valide si celui-ci est produit par précipitation au fond du tube. La réaction positive, on peut dire lorsque les cellules sont disposées sous la forme d'un parapluie renversé, occupant tout le fond. La réaction négative est marqué lorsque les globules rouges se déposent sous la forme d'une colonne ou boutons dans le centre du fond.

réaction de précipitation (RP)

réactions sérologiques de ce type servent à identifier les antigènes des particules extrêmement petites. Cela peut être, par exemple, des protéines (ou des parties de ceux-ci), les composés de protéines avec des lipides ou des hydrates de carbone, une partie des bactéries et leurs toxines.

Sera pour la réaction est obtenue par l'infestation artificielle des animaux, généralement des lapins. Dans cette méthode, vous pouvez obtenir absolument tout sérum précipitante. Mise en scène de précipitation sérologique mécanisme d'action similaire sur agglutination. Les anticorps contenus dans le sérum se lient à des antigènes dans la solution colloïdale pour former de grandes molécules de protéine, qui sont déposés sur le fond du tube ou sur le substrat (gel). Cette méthode est considérée comme très spécifique et peut détecter même des traces de la substance.

Utilisé pour diagnostiquer la peste, la tularémie, l' anthrax, la méningite et d' autres maladies. Ont également participé à l'examen médico-légal.

Test de précipitation de gel

Les tests sérologiques peuvent être effectuées non seulement dans un milieu liquide, mais dans le gel d'agarose. Ceci est appelé méthode de précipitation diffuse. Grâce à elle, étudier la composition des mélanges antigéniques complexes. Cette méthode est basée sur le chimiotactisme des antigènes des anticorps, et vice versa. Le gel se déplacent vers l'autre à des vitesses différentes et réunion pour former des lignes de précipitation. Chaque ligne – un ensemble de K-AT.

Neutralisation exotoxine antitoxine (RN)

sérum antitoxique peut neutraliser l'exotoxine qui produisent des micro-organismes. Sur la base de ces données et les tests sérologiques. Microbiologie utilise cette méthode pour le titrage des sérums, des toxines et anatoxines, ainsi que leur activité thérapeutique. La force de la neutralisation de la toxine est déterminée par les unités conventionnelles – AE.

En outre, en raison de cette réaction peut déterminer les espèces ou types appartenant exotoxine. Il est utilisé dans le diagnostic du tétanos, la diphtérie, le botulisme. L'étude peut être réalisée « sur le verre », et dans un gel.

réaction de lyse (RL)

Le sérum immun, qui pénètre dans le corps du patient, dispose, en dehors de sa fonction principale de l' immunité passive, même et les propriétés lytiques. Il est capable de dissoudre les agents microbiens, virus éléments cellulaires et étrangers entrant dans le corps du patient. En fonction de la spécificité des anticorps inclus dans les bactericidin isolé sérum, cytolysines, spirohetoliziny, hémolysines et autres.

Ces anticorps spécifiques sont appelés « complément ». Il se trouve dans presque tous les fluides corporels, il a une structure complexe de protéines et est très sensible à l'augmentation de la température, secouée, acides et lumière directe du soleil. Mais à l'état sec est en mesure de maintenir leurs propriétés lytiques jusqu'à six mois.

Il existe certains types de tests sérologiques de ce type:

– bactériolysie;

– hémolyse.

Bactériolysie est effectuée en utilisant le sérum sanguin et le sérum immunitaire spécifique du patient avec des germes vivants. Si, le chercheur voit la lyse des bactéries, et la réponse sera considérée comme un nombre suffisant de complément positif est présent dans le sang.

La deuxième réponse sérologique du sang est que la suspension d'érythrocytes traitée sérum de patients contenant des hémolysines, qui sont activés uniquement en présence d'un complément particulier. S'il y a un, le laboratoire en regardant la dissolution des globules rouges. Cette réaction est largement utilisé dans la médecine moderne pour déterminer le titre du complément (c.-à-la plus petite quantité provoquant la lyse des globules rouges) dans le sérum sanguin et pour la production d'essai de liaison du complément. Il était de cette manière conduit réaction sérologique pour la syphilis – Wasserman.

la fixation du complément (RSK)

Cette réaction est utilisée pour détecter des anticorps dans le sérum du patient d'un agent infectieux, ainsi que pour identifier l'origine de sa structure antigénique.

Jusqu'à ce stade, nous avons décrit un tests sérologiques simples. RAC considéré comme réaction difficile, car il interagit pas deux, mais trois éléments: un anticorps, un antigène et complément. Son essence réside dans le fait que l'interaction entre l'anticorps et l'antigène se produit seulement en présence de protéines complimenteront qui sont adsorbés sur la surface du complexe formé K-AT.

Eux-mêmes antigènes après addition du complément, sous réserve de modifications importantes, qui indiquent la qualité de la réaction. Cela peut être la lyse, hémolyse, immobilisation, effet bactéricide ou bactériostatique.

La réaction elle-même se déroule en deux phases:

1. La formation d'anticorps-antigène, ce qui est visuellement perceptible chercheur.
2. Modification de l'antigène sous l'action du complément. Cette phase peut généralement être attribuée à l'œil nu. Si la réponse visuelle n'est pas visible, utilisez le système indicateur supplémentaire qui permet de détecter les changements.

système d'indicateurs

Cette réaction est basée sur la liaison du complément. Les tubes à essai heures après la mise en RSK a ajouté des erythrocytes de mouton purifié et hémolytique de sérum ne contenant pas de complément. Si le tube a été laissé complément non liée, il rejoindra le N-AT complexe formé entre les cellules sanguines de mouton et hémolysine, et provoquer leur dissolution. Cela signifie que le DGC est négatif. Si les globules rouges sont restés intacts, puis, en conséquence, la réaction est positive.

hémagglutination (RHA)

Il y a deux hémagglutination fondamentalement différents. L'un d'eux – sérologique, il est utilisé pour la détermination des groupes sanguins. Dans ce cas érythrocytes interagissent avec des anticorps.

Et la deuxième réaction est pas liée à sérologique, car les globules rouges réagissent avec l'hémagglutinine produite par des virus. Étant donné que chaque excitateur agit uniquement sur les érythrocytes spécifiques (poulet, mouton, singe), on peut supposer cette réaction étroitement spécifique.

réponse claire positive ou négative, il est possible pour l'emplacement des cellules sanguines dans la partie inférieure du tube. S'ils pensent ressemble à un parapluie inversé, le virus souhaité est présent dans le sang du patient. Et si tous les globules rouges forment comme une des colonnes de pièces de monnaie, il n'y a pas d'agents pathogènes inconnus.

La réaction d'inhibition de l'hémagglutination (HAI)

Cette réaction très spécifique, ce qui permet d'établir la forme, le type de virus ou la présence d'anticorps spécifiques dans le sérum du sang du patient.

Son essence réside dans le fait que les anticorps ajoutées dans le tube contenant le matériau d'essai, empêche le dépôt d'antigènes sur les érythrocytes, arrêtant ainsi l'hémagglutination. Ceci est une indication qualitative de la présence d'antigènes spécifiques dans le sang à un virus désiré particulier.

Réaction de immunofluorescence (RIF)

La réaction est basée sur la capacité d'identifier des complexes avec la microscopie à fluorescence AT-AH après les colorants flyuorohromnymi de traitement. Cette méthode est simple à utiliser, ne nécessite pas l'isolement de la culture pure et prend peu de temps. Il est indispensable pour le diagnostic rapide des maladies infectieuses.

Dans la pratique, ces tests sérologiques sont divisés en deux catégories: directs et indirects.

RIF direct antigène qui produit déjà traité sérum fluorescent. Et indirecte est que le médicament est d'abord traité avec Diagnosticum classique comprenant des anticorps dirigés contre l'antigène souhaité puis lactosérum fluorescent ré-application, qui est spécifique pour les protéines du complexe K-AT, et les cellules microbiennes sont visibles par microscopie.